方法的发展

1990年Sumiey提出，OECD于1996年采用，于2001年更新列为指南TG423。目前欧洲使用此方法比较普遍。

1948年Dixon和Mood首次提出，OECD于1998年采用，2006年更新列为指南TG425。

原理简介

固定5,50,300,2000mg/kg四个剂量组，（必要时可以增加5000mg/kg)，依次使用同一性别的动物（一般为雌性），经口染毒。根据预试验结果，确定会发生毒性反应，但不产生严重的毒性反应或死亡的剂量作为起始剂量进行试验，再根据观察的结果调整毒性剂量，当出现以下情况时终止试验：1，当出现明显的毒性反应或已确认不多于1只动物死亡；2，最高剂量未出现毒性反应；3，最低剂量动物出现死亡。

试验分为若干阶段，每阶段使用3只动物，最多6只动物。已设计四个固定的剂量5,50,300,2000mg/kg，选定一个初始剂量进行试验，根据试验结果（动物死亡或者濒临死亡的动物数量）来判定是否进行下一步试验或者终止试验。有三种可能的结果：1，无需进一步试验即可分级；2，同一剂量水平再做3只动物；3，在高一级或低一级剂量水平另做三只动物。

由限度试验和主试验组成，限度试验分为2000mg/kg和5000mg/kg两个剂量水平，用于受试物毒性较小的情况，两种剂量限度试验过程有细微差别，但最多只用5只动物。主试验是一个预先设定的染毒程序，每次染毒1只动物，有1只动物染毒后的反应决定第2只动物接受染毒的剂量，若动物存活，第2只动物给予高一级剂量，若第1只动物死亡或出现濒临死亡的状态，则第2只动物给予低一级别剂量。在对每只染毒动物观察48小时候，可以决定是否对下一只动物染毒以及确定染毒剂量。当满足停止试验的标准时，可以结束试验。

每次使用动物数量

5-7只

平均7只

6-9只

每次试验动物死亡数量

1只

2-3只

2-3只

5只

3只

1只

20只

12只

15只

实验动物数

只需10～20只动物（预试一般不超过5只动物；主实验：每个剂量最少用10只动物，雌雄各半）

6-12只动物 （2000mg/kg 限量试验:6只动物; 5000mg/kg: 3只动物; 主实验:最多12只）  

限量试验: 最多5只；  主实验: 通常4-6只，最多15只

剂量选择

限量实验: 2000 or 5000mg/kg bw; 主实验: 5,50, 300, 2000mg/kg bw

限量实验: 2000 or 5000mg/kg bw;主实验: 5,50, 300, 2000mg/kg bw

限量实验: 2000 or 5000mg/kg bw;  1.75 、5.5 、17.5 、55 、175 、550 、2000 mg/kg （或有特殊要求时1.75 、5.5 、17.5 、55 、175 、550 、1750 、5000 mg/kg

观察的指标

不以动物死亡作为研究的终点，而是以毒性发展的临床体征的观察作为终点，对化学品急性毒性进行分类。

用于危害评估危害分类，以及危害度评价，它是以动物死亡作为试验终点的分阶段试验法。

以动物的死亡作为研究的重点，同时进行毒性表现的观察。

不能精确估计LD50的值和LD50的置信限，但是可以粗略的估计LD50的范围。同样对于死亡剂量反应曲线的斜率和置信限也无法估计。

不能精确估计LD50的值和LD50的置信限，但是可以根据提供的数据使用最大相似法进行计算。该方法也适用于死亡剂量反应曲线的斜率和置信限的估计。

不但可以进行毒性表现的观察，还可以估算LD50及其可信度，适用于能引起动物快速死亡的受试物。不适用于有迟发型毒性反应特点的物质。

应用情况

采用这种方法的实验室较少

普遍使用，大部分国家接受

美国、中国推荐使用

特点

固定剂量、观察动物反应,不以死亡为依据,而且按毒性症状来判断该物质的危险程度

每阶段3只动物，2-4阶段即可判定急性毒性。死亡动物数一般不超过3只。

节省实验动物，同时，不但可以进行毒性表现的观察，还可以估算LD50 及其可信限。死亡动物数一般不超过3只。