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Alejandro del Barrio
Evologic Technologies公司首席科学家
农业微生物产品的主要优点之一是其在环境中较低的持久性,这最大限度减少了作物上的残留物和对非靶标生物的负面影响。但是,这个优势同时也是它的最大弱点,即,在功效和稳定性方面,它给产品开发带来巨大挑战[1]。在基于活体微生物的产品中,活细胞的减少导致产品功效损失,产生供应链和商业风险,以及资源效率及食品安全方面的影响。
可以假设的是,微生物产品的田间性能,在不同土壤、作物和气候环境中大不一样,但针对时间推移对其稳定性的影响,以及产品与其他农业投入品的相容性,所做的研究又有多少呢[2]。所有这些都和配方开发有关,并对配方设计产生局限,带来挑战,即,在生产和应用过程中如何保证微生物的稳定、功效和产品质量。
制剂开发方案
农业投入品市场中最成功的微生物产品是单一革兰氏阳性细菌 - 苏云金杆菌产品。基于苏云金杆菌的产品约占生物农药市场95%[3],其2024-2032年预期复合年增长率为6.4% [4]。从混配角度来看,这可能不足为奇,因为苏云金杆菌是一种高稳定生物体,对各种压力源均耐受。革兰氏阴性菌和真菌混配,开发设计要求更高,因为苏云金杆菌细胞结构非常敏感。这类微生物的配方知识和能力欠缺,生产成本高,极大地限制了新型微生物产品的开发与应用。
Evologic意识到这个问题,所以创建了BioShield® ,这是个平台技术,它可以经济地稳定胶囊中的微生物,在技术上满足行业和农民需求要求。
BioShield® – 微生物制剂开发新方法
传统农业微生物制剂 - 固体和液体制剂,在维持微生物细胞稳定和活力方面,面临重大挑战 [2,5]。微生物可以被封装于天然生物聚合物中,在胶囊内形成防护环境,保护微生物细胞,使其免受压力影响。从制造过程到现场应用各个步骤,微生物细胞都会得到保护。
大多数封装始于微生物生物反应器发酵,这是个关键步骤,在定制代谢情况下,它会产生较高细胞密度,这是后续工序所需要的。发酵后的微生物与安全、完全可降解的生物聚合物混合,会产生可封装的液体,形成液滴并聚合,最后形成含微生物的水凝胶胶囊 [6](见图1)。胶囊最终进行干燥,继续用于后续工艺。胶囊内的保护性微环境可延长产品保质期,它会逐步释放微生物,延长施用后的持久性。
图 1:离子凝聚法封装
摘自Vemmer et al. (2013) [6]
高昂的产品成本,一直阻碍着这项前景技术用于商业化生产,而BioShield® 解决了这个问题。BioShield®可集成上游工序,定制生长介质,优化干燥工艺,实现高通量,以具有成本竞争力的方式,生产出所需代谢和细胞密度的微生物。
优化的上游发酵和定制的干燥程序,使微生物能够适应压力,触发细胞生理调节,适应感知的环境压力。因此,微生物细胞更耐干燥、更稳定、保质期更长,并在应用中表现出一致的效果。
稳定性和保质期得以提高的主要好处是,活体微生物细胞密度更高,施用量更小,从而降低成本,同时不影响施用质量。
应用兼容性 – 定制胶囊尺寸
封装的最后一关是,如何生产与农业应用工艺相容的胶囊,其中最常见的方法是采用各种喷施技术。胶囊尺寸必须很小,以便轻松穿过狭小的喷嘴,因为大颗粒会堵塞喷嘴,影响正常药液传递(见图2)。
图2:标准封装技术生成的胶囊(a) 和使用 BioShield® 封装技术生成的微小纳米胶囊(b)
Evologic成功开发的BioShield® ,就是为了解决这一技术挑战,它实现了小至20μm的纳米胶囊的生产。这些纳米胶囊可以将高度浓缩产品传递到各类环境中,甚至是小尺寸表面,如植物种子。除胶囊尺寸可定制外,该技术还可控制各种不同的物理特性,通过定制,与工业应用工艺相容。
BioShield®用于革兰氏阴性菌
革兰氏阴性菌涉及前景广阔的农业解决方案,它既可以作为生物刺激素(如根瘤菌、固氮菌 - 固氮内共生细菌)和生防剂(如假单胞菌 - 根病原体控制)。然而,它们的特定细胞壁结构和环境应激敏感性,对配方设计带来重大挑战。通过BioShield®,Evologic开发出优异的干燥工艺,优于目前最先进的干燥工艺(冷冻干燥)。Evologic的干燥工艺增强了革兰氏阴性菌的活力和稳定性,将其保质期延长至12个月,更好地满足农业生产需求(见图3&4)。
图3:革兰氏阴性菌活力损失对照 ( BioShield® 对照 冷冻干燥)
存储时间,4℃ (天)
图4:革兰氏阴性菌存储活力,LOG10,CFU/g ,180 天,4°C,活力损失为 0.65 LOG10
BioShield®用于真菌
与细菌相比,真菌细胞结构更复杂,细胞尺寸更大,所以配方技术要求更高。BioShield® 可调整胶囊尺寸,封装更大的真菌细胞,同时维持胶囊的小尺寸,以便与农业应用技术相容。通过概念验证,Evologic已实现AMF孢子封装,活力得以延长(见图5)。
图5:BioShield® 封装的AMF细胞
结论
Evologic的Bioshield技术,用于解决棘手的微生物生产中的稳定和应用等关键问题,如革兰氏阴性细菌和真菌;Bioshield提供高浓缩、稳定的产品,粒径可定制,能够将微生物产品与各类农业生产无缝连接;Bioshield 可有效稳定最棘手的微生物,实现长达12个月的保质期。
参考文献
1.有害生物综合管理 - 生物农药开发、监管和使用(2011)。David Chandler. doi: 10.1098/rstb.2010.0390
2.农业微生物应用的现实和希望(2021)。Bruna D. Batista. doi: 10.1111/1751-7915.13866.
3.作物保护苏云金芽孢杆菌纳米农药(2019)。P.S. Vimala Devi. doi:10.1016/B978-0-12-815829-6.00010-3
4.苏云金芽孢杆菌全球市场调查报告(2024年)及市场增长报告。
5.非孢子细菌接种剂细胞活力维持和评价(2018)。 Berninger, Teresa, et al. doi: 10.1111/1751-7915.12880
6.微生物生防产品封装方法综述(2013)。Marina Vemmer, and Anant V. Patel. Biological Control 67.3 (2013): 380-389. doi:10.1016/j.biocontrol.2013.09.003
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